Заявление бланк енвд 2: образец заполнения заявление в 2017 году

Форма ЕНВД-2 — образец заполнения заявления

14 апреля 2020

Печиева Виктория Евгеньевна

0

Добавить в избранное
В избранное

Поделиться

ЕНВД-2 — документ, без которого ИП не сможет начать вмененную деятельность. Его нужно корректно заполнить и вовремя сдать, иначе перейти на вмененку не получится.

• Зачем нужен бланк ЕНВД-2
• Нюансы заполнения и сдачи заявления в ФНС

Зачем нужен бланк ЕНВД-2

Отменят ли ЕНВД в 2021 году? Об этом наш материал.

Форма ЕНВД-2 предоставляется в ФНС индивидуальными предпринимателями, желающими встать на учет в качестве плательщиков ЕНВД. Начать применять вмененку можно в любой момент: чтобы встать на учет, предпринимателю нужно в течение 5 дней после фактического проведения первых «вмененных» хозопераций направить заявление ЕНВД-2 в ФНС. Такие же правила действуют для тех, кто переходит на вмененку с ОСНО.

При переходе с УСН ситуация иная: начать работать по вмененке можно только с 1 января следующего года (п. 3 ст. 346.13 НК РФ). Поэтому рассматриваемое заявление следует предоставить налоговикам в течение 5 первых рабочих дней января.

Читайте, какие налоги не платят при применении ЕНВД.

Форма введена в действие приказом ФНС России от 11.12.2012 № ММВ-7-6/941@. Правила ее оформления закреплены в приложении № 10 к данному приказу.

Бланк формы ЕНВД-2 можно скачать здесь:

Скачать бланк

Нюансы заполнения и сдачи заявления в ФНС

В 2020 году произошли изменения в части возможности применения ЕНВД при розничной торговле маркированными товарами. Многим плательщикам ЕНВД пришлось частично или полностью перейти на УСН.

При подготовке документа к сдаче в ФНС нужно иметь в виду, что он сдается:

• при расположении всех объектов налогообложения ИП (образующих физические показатели для расчета налога) на территории с одним кодом ОКТМО — в ту инспекцию, в ведении которой данные объекты находятся;
• расположении объектов на территории с одним кодом ОКТМО, но в юрисдикции разных инспекций — в любую из соответствующих инспекций по выбору;
• расположении объектов на территориях с разными кодами ОКТМО и в юрисдикции одной инспекции — в соответствующую инспекцию;
• расположении объектов на территориях с разными кодами ОКТМО и в юрисдикции разных инспекций — в каждую из соответствующих инспекций.

Таким образом, на титульном листе указывается код нужной инспекции. Если приходится уведомлять несколько инспекций, то в каждую из них следует отправить отдельное заявление о постановке на учет.

Бланк ЕНВД-2 сдается в инспекцию по месту жительства ИП, если он занимается:

• автомобильными перевозками;
• розничной торговлей в мобильном формате;
• услугами по размещению рекламы на транспорте.

К бланку заявления предусмотрено приложение. Виды хоздеятельности для указания в нем определяются не по ОКВЭД, а по приложению № 5 к порядку, введенному приказом ФНС России от 26.06.2018 № ММВ-7-3/414.

Скачать образец заполнения уведомления о переходе ИП на вмененку можно по ссылке:

Скачать образец

Мы уже рассказывали подробнее о постановке на учет при ЕНВД.

***

ИП для постановки на учет в ФНС в качестве плательщика вмененки направляет в свою ИФНС (либо ту, которая контролирует принадлежащий ему объект налогообложения в другом муниципалитете) специальное заявление ЕНВД-2. Его оформляют по правилам, изложенным в приложении № 10 к приказу ФНС РФ № ММВ-7-6/941@.

Еще больше материалов по теме — в рубрике «ЕНВД».

Источники:

• Налоговый кодекс РФ

• приказ ФНС России от 11.12.2012 № ММВ-7-6/941

• приказ ФНС России от 26.06.2018 № ММВ-7-3/414

Добавить в избранное
В избранное

Поделиться

Предыдущий материал

Следующий материал

Образец заявления ЕНВД-2 ИП 2022

Дидух Юлия
бухгалтер, юрист

24 февраля 2019

12853

Распечатать

Поделиться

Размер шрифта:

Для того чтобы начать применять ЕНВД индивидуальному предпринимателю, необходимо написать заявление в территориальный орган ФНС. Особенности и образец заполнения ЕНВД-2 для ИП 2020 в этом материале.

Содержание

Система налогообложения ЕНВД заключается во взимании налога не с фактического дохода, а со специально рассчитанного предполагаемого значения, которое определяется на основании специальных физических показателей (площадь торгового зала, количество транспортных средств, численность работников и т. п.). Право применения единого налога на вмененный доход имеют все индивидуальные предприниматели, отвечающие определенным условиям. Кроме того, необходимо, чтобы возможность применения «вмененки» была закреплена на местном уровне.

Так как «вмененка» разрешена не для всех видов деятельности, переход на нее, в соответствии с требованиями ст. 346.28 НК РФ, является добровольным. Выбрать этот режим ИП может непосредственно сразу после регистрации своего статуса в ФНС, а также во время осуществления деятельности. Для того чтобы сообщить о своем намерениии, ему необходимо заполнить и направить в орган налоговой службы России заявление. Этот документ следует оформлять на специальном бланке, который мы рассмотрим подробнее. Скачать бесплатно бланк заявления ЕНВД-2 (2017), а также образец заполнения можно будет в конце статьи.

Подача заявления при регистрации нового ИП

Для того чтобы избрать в качестве системы налогообложения ЕНВД, новому предпринимателю необходимо встать на налоговый учет в качестве плательщика по месту осуществления деятельности или нахождения объектов. После этого он в течение 5 рабочих дней с даты начала работы имеет право заявить в территориальную налоговую инспекцию по месту регистрации о своем желании применять этот налоговый режим. Для этого необходимо заполнить заявление установленной формы, которое можно на официальном сайте ФНС бесплатно скачать. Бланк ЕНВД-2 для ИП утвержден приказом ФНС России от 11.12.2012 № ММВ-7-6/941@ и называется форма по КНД 1112012.

Подача заявления на «вмененку» в середине года

Каждый ИП может перейти на единый налог в середине налогового периода (календарного года) при условии его первоначального выбора или начале новой деятельности, разрешенной на «вмененке», например при открытии магазина, кафе или организации грузоперевозок. Алгоритм перехода и порядок заполнения бланка в этом случае не отличаются от предусмотренных для новых предпринимателей. Однако если ИП открыл новый объект налогообложения (например, магазин), а не начал вести новый вид деятельности (например, торговлю) в середине года, то он не имеет права перехода. Это право сохраняется только в случае совмещения с общей системой налогообложения. В любом случае ему потребуется образец заявления ЕНВД-2 для ИП 2020, который необходимо направить в ИФНС.

Образец заявления ЕНВД-2 для ИП

Заполнить эту форму, которая состоит всего из двух разделов, совсем не сложно. Главная сложность заключается в указании правильных кодов объектов налогообложения. Ведь налоговики хотят видеть в форме не ОКВЭД2, а значения из приложения к налоговой декларации по единому налогу. В этом перечне, к примеру, 01 означает «Оказание бытовых услуг», а 05 — «Оказание автотранспортных услуг по перевозке грузов».

Подробнее с ним можно ознакомиться в приложении № 5 к приказу ФНС России от 04. 07.2014 № ММВ-7-3/353@(ред. от 19.10.2016). Всего таких кодов двадцать два.

На титульном листе заявления нужно указать все данные ИП: Ф.И.О., ИНН и ОГРНИП, код налогового органа и дату начала применения ЕНВД.

В конце необходимо поставить личную подпись и дату заполнения.

На второй странице предусмотрены данные о видах деятельности. Их может быть несколько.

В течение 5 дней в ФНС будут рассматривать полученную заявку, после чего пришлют уведомление о постановке на учет в качестве плательщика на «вмененке». Это очень важный документ, ведь именно он служит доказательством о праве применять единый налог, а не ОСНО или УСН. Датой начала такого налогообложения должна являться дата, когда был составлен образец ЕНВД-2 (2017) формы заявки о регистрации в качестве плательщика.

Вам в помощь образцы, бланки для скачивания

Скачать форму ЕНВД-2

Скачать образец заполнения ЕНВД-2 2020

‘;}

Распечатать

Поделиться

Дидух Юлия
бухгалтер, юрист

В 1998 году закончила КГАУ, экономический факультет по специальности бухгалтер. В 2006 году ТНУ, юридический факультет по специальности гражданское и предпринимательское право. Опыт работы бухгалтером с 1998 по 2007 год. Пишу статьи с 2012 года

Все статьи автора

Вам может быть интересно:

Подписывайтесь на наш канал в Telegram

Мы расскажем о последних новостях и публикациях

Подписаться

Экологический дизайн (BEnvD) | Explore UM

Базовое образование в области дизайна

Дизайн-студии

Учебная программа по экологическому дизайну построена вокруг последовательности действий в дизайн-студиях, которые обеспечивают форум для изучения сложных отношений между людьми и природной и искусственной средой, которые представляют собой места и артефакты культурного наследия. производство. В течение четырехлетнего периода вы приобретете необходимые знания и навыки для работы в самых разных областях дизайна.

Помещения

Студенты, изучающие экологический дизайн, имеют доступ ко многим исследовательским и проектным объектам архитектурного факультета. CADLab предлагает 18 мощных компьютеров со стандартным отраслевым программным обеспечением, три фотокомнаты, сканеры самообслуживания и широкоформатный принтер. FABLab и мастерская предоставляют доступ к лазерным резакам, 3D-принтерам, фрезерному станку с ЧПУ, вакуумному формовщику и широкому спектру инструментов для работы с деревом и пластиком.

Экспериментальное обучение

Совместная программа обучения/комплексной работы предоставляет практический опыт, помощь в финансировании вашего образования и руководство для будущей профессиональной специализации. Семестровые программы обмена и экскурсии продолжительностью от одного дня до трех недель расширят ваш кругозор и помогут по-новому взглянуть на мир.

Открытие дверей в индустрию дизайна

Степень в области экологического дизайна может привести вас к карьере специалиста по архитектуре, координатора по коммуникациям, дизайнера мебели, менеджера проекта, чертежника и т.д. Студенты, имеющие BEnvD, имеют право подавать заявки на факультеты архитектуры, градостроительства, дизайна интерьера и ландшафтной архитектуры, а также на другие программы для выпускников по всему миру.

Детали программы

Степень бакалавра экологического дизайна (BEnvD) — это четырехлетняя программа, состоящая из двух лет общих базовых исследований, за которыми следуют два года предпрофессиональных промежуточных исследований в одной из трех областей: архитектура, внутренняя среда или ландшафт. + Урбанизм.

Ожидаемая продолжительность: 3 года (плюс квалификационный год)

Годы 1 и 2 программы обеспечивают прочную основу базовых знаний и языка, общих для всех дисциплин экологического дизайна. Студенты приходят к пониманию целостной природы дизайна окружающей среды и на ранней стадии начинают устанавливать богатый и междисциплинарный диалог со своими сверстниками, открывая при этом сильные стороны и интересы, связанные с конкретной дисциплиной дизайна. Годы 3 и 4 предоставляют возможность бросить вызов академическим и профессиональным теориям и практикам дизайна, характерным для одной из трех конкретных дисциплин:

• Архитектура
• Внутренняя среда
• Пейзаж + урбанистика

Курсы 1-го года обучения обычно завершаются до поступления на программу.

• EVDS 1602: визуальная грамотность (3 кредитных часа)
• EVDS 1660: История культуры, идей и окружающей среды 1 (3 кредитных часа)
• EVDS 1680: экологические технологии (3 кредитных часа)
• EVDS 2100: Городская медиа-лаборатория (3 кредитных часа)
• EVDS 2200: Экология и дизайн (3 кредитных часа)
• EVDS 2300: Материалы, конструкции и сборки (3 кредит-часа)
• EVDS 2400: Visual Media 1 (3 кредитных часа)
• EVDS 2500: Design Studio 1 (6 кредитных часов)

Вариант архитектуры экологического проектирования, 3-й год (ED3 Arch) и ED AMP, 1-й год

• EVAR 3000: досовременная история и теория I (3 кредитных часа)
• EVAR 3004: Архитектурные технологии 1: Структурное и устойчивое использование материалов (3 кредитных часа)
• EVAR 3008: Студия архитектурного дизайна 1 (9кредитные часы)
• EVAR 3014: Рисование: от руки и в цифровом формате (3 кредитных часа)

Вариант архитектуры экологического проектирования, 4-й год (архив ED4) и ED AMP, 2-й год

• EVAR 4000: Современная история архитектуры и теория I (3 кредитных часа)
• EVAR 4002: Архитектурные технологии 3: Строительные системы (3 кредитных часа)
• EVAR 4008: Архитектурные технологии 4: Комплексный отчет о технологиях проектирования (3 кредитных часа)
• EVAR 4004: Студия архитектурного дизайна 3 (9кредитные часы)

Год 3 (ED3 IE)

• EVIE 3002: История и теория дизайна интерьера 1 (3 кредитных часа)
• EVIE 3004: Материалы, сборки и деталировка (3 кредит-часа)
• EVIE 3008: Студия дизайна интерьера 3. 1 (6 кредитных часов)
• EVIE 3012: Освещение и цвет салона (3 кредитных часа)
• EVIE 3014: Человеческий фактор и опыт окружающей среды (3 кредитных часа)

Год 4 (ED4 IE)

• EVIE 4000: История и теория 2 (3 кредитных часа)
• EVIE 4006: Методы и процессы проектирования (3 кредитных часа)
• EVIE 4010: Студия дизайна интерьера 4.1 (6 кредитных часов)
• EVIE 4014: Advanced Interior Design Media (3 кредитных часа)

3-й год (ED3 LU)

• EVLU 3000: History of Designed Environments (3 кредитных часа)
• EVLU 3002: Планирование площадки (3 кредитных часа)
• EVLU 3004: Экология и дизайн 2 (3 кредитных часа)
• EVLU 3008: Студия 4: Сети и инфраструктура (9кредитные часы)
• EVLU 3012: Морфология участка + классификация (3 кредитных часа)

Год 4 (ED4 LU)

• EVLU 4014: Studio 6: Emergent Futures (9 кредитных часов)
• EVLU 4016: История ландшафта + урбанистика (3 кредитных часа)
• EVLU 4002: Строительные материалы (3 кредитных часа)
• EVLU 4008: Растения, экосистемы и дизайн (3 кредитных часа)

Вариант подготовки к магистратуре по архитектуре (ED AMP)

Для студентов, уже имеющих степень бакалавра, вариант подготовки к магистерской программе по архитектуре в рамках программы экологического дизайна является отличным способом претендовать на поступление в магистерскую программу факультета архитектуры.

Первый поток (ED AMP 1: два года обучения)

Для студентов, имеющих признанную степень бакалавра, но не имеющих формального образования в области дизайна. После успешного выполнения всех требований для этого двухлетнего варианта студенты будут иметь право на получение степени бакалавра экологического дизайна.

Второй поток (ED AMP 2: один год обучения)

Для студентов, которые уже имеют степень бакалавра в области дизайна в смежных областях дизайна, таких как дизайн интерьера или ландшафтная архитектура, или у которых есть степень в области экологического дизайна в области внутренней среды или ландшафта. + поток урбанистики. Эти учащиеся могут быть рассмотрены в каждом конкретном случае для помещения в программу экологического дизайна 4 года по варианту архитектуры, но не будут иметь права на получение степени бакалавра экологического дизайна.

Требования к кандидатам

Ниже приведены минимальные требования для участия в программах BEnvD и ED AMP. Выполнение этих требований не гарантирует зачисление в программы.

Если вы не соответствуете требованиям для продвинутого поступления на программу бакалавриата экологического дизайна, вы можете иметь право на поступление на факультет искусств или на другую программу. Если вы раньше не учились в университете, вы можете подать заявку на программу с прямым поступлением, например, Университет 1.

Требования для поступления на программу получения степени

Бакалавр экологического дизайна — это программа продвинутого уровня , что означает, что вы должны пройти один год обучения на университетском уровне, включая несколько обязательных и рекомендуемых курсов, с минимальным скорректированным средним баллом 2,50, прежде чем вы сможете быть рассмотрены для поступления.

Требования к поступающим на программу подготовки магистра архитектуры

Программа подготовки магистра архитектуры требует, чтобы вы уже имели степень бакалавра с минимальным скорректированным средним баллом 3,0 за последние 60 кредитных часов обучения в университете, чтобы быть рассмотренным для поступления.

Зачисление на программу «Дизайн окружающей среды: подготовка к магистратуре по архитектуре» проводится на конкурсной основе и ограничено. Студенты будут приниматься на основе ежегодного процесса отбора. Кандидаты, отвечающие минимальным академическим требованиям, имеют право на рассмотрение по усмотрению Отборочной комиссии Департамента архитектуры.

Как применить

Плата за подачу заявления для местного студента: 100 долларов США
Плата за подачу заявления для иностранных студентов: $120

Заявления в Университет Манитобы заполняются онлайн. Чтобы начать работу с приложением, нажмите кнопку Запустить или продолжить работу с приложением. Онлайн-заявка состоит из нескольких частей, и вам может потребоваться представить стенограммы, подтверждение владения английским языком и другие документы.

В рамках процесса подачи заявки следующие категории заявителей должны представить портфолио предыдущих работ:

• Заявители, подающие заявку на программу бакалавриата экологического дизайна в категориях индивидуального рассмотрения и кандидатов из числа коренных народов Канады
• Все заявители, подающие заявку на экологический дизайн: вариант подготовки мастер-класса по архитектуре

Портфолио отражает дизайнерские интересы, наклонности, творческие способности и потенциал в широком спектре начинаний.

Портфолио содержит исчерпывающую информацию о творческих достижениях и потенциале заявителя, а также об интересах в области дизайна. Визуальные и письменные работы считаются ценными. Поскольку понятно, что многие кандидаты приходят из дисциплин или с опытом, которые не обязательно используют графические формы общения, содержание портфолио должно быть направлено на то, чтобы проиллюстрировать любым возможным способом ваши творческие способности и потенциал. Комитету очень интересны проекты, которые вы делаете самостоятельно, а также те, которые выполняются по школьным заданиям. Эти проекты можно сфотографировать или скопировать с кратким описанием каждого проекта (максимум один абзац) для формирования Портфолио.

В следующем списке перечислены различные формы, которые может принимать этот материал:

• Письменные: Поэзия, статьи, путевые заметки, исследовательские работы, музыка и т. д.
• Графика: фотография, наброски, рисунки, картины или технические чертежи и т. д.
• Построено: фотографии, чертежи и эскизы построенных проектов и творческих работ

Приемная комиссия просит использовать следующие рекомендации для создания аккуратного, ясного и эффективного портфолио:

• Минимальный размер: 8,5 x 11 дюймов, максимальный размер: 11 x 17 дюймов, переплет в вертикальном или горизонтальном формате.
• Имя должно быть хорошо видно на корешке.
• Рекомендуются качественные пластиковые листы для защиты каждой страницы портфолио.
• Предоставьте оглавление или последовательную идентификацию глав с работами, представленными в хронологическом порядке.
• К каждому изображению и/или проекту должен прилагаться краткий пояснительный текст (максимум один абзац). Не включайте никаких длинных письменных описаний.
• Зачисление требуется для всех работ, представленных в портфолио.
• Не включайте компакт-диски, видео, фильмы, слайды и т. д. Распечатывайте изображения из анимированных материалов (принимаются только распечатанные изображения).
• Не присылайте нечеткие или плохо воспроизведенные фотографии, репродукции или рисунки. Фотографии не должны быть меньше 3х5 дюймов.

Портфолио

Портфолио должно содержать всестороннее представление творческих достижений и потенциала заявителя, а также интересов дизайна. Ценными считаются как визуальные, так и письменные работы.

В случае Программа подготовки магистров архитектуры, вариант 1 (AMP 1) для заявителей : Поскольку многие из вас приходят из дисциплин или с опытом, которые обычно не используют графические формы общения, содержание Портфолио должно быть направлено на то, чтобы максимально проиллюстрировать ваши творческие способности и потенциал.

В случае экологического дизайна Программа подготовки магистров архитектуры Вариант 2 (AMP 2) заявители : Вы должны собрать всеобъемлющее портфолио, включающее творческие работы как из ваших предыдущих исследований, так и самостоятельную работу.

В следующем списке перечислены различные формы, которые может принимать этот материал:

• Письменные: Поэзия, статьи, путевые заметки, исследовательские работы, музыка и т. д.
• Графика: фотография, эскизы, рисунки, картины или технические чертежи и т. д. Поскольку в архитектуре мы в основном общаемся посредством рисунков, важно включить как можно больше различных примеров.
• Построено: фотографии, чертежи и эскизы построенных проектов и творческих работ

Приемная комиссия просит использовать следующие рекомендации для создания аккуратного, четкого и эффективного портфолио:

• Электронная заявка (максимальный размер PDF 20 МБ) • Формат: Минимальный размер: от 8,5” x 11” до максимального размера : вертикальный или горизонтальный формат в переплете 11 x 17 дюймов.
• Предоставьте оглавление или последовательную идентификацию глав с работами, представленными в хронологическом порядке. Пожалуйста, сведите к минимуму любое графическое оформление, так как нам гораздо интереснее увидеть вашу работу.
• К каждому изображению и/или проекту должен прилагаться краткий пояснительный текст (максимум один абзац). Не включайте никаких длинных письменных описаний.
• Может быть включена предыдущая школьная работа, а также независимая или самостоятельная работа. В случае школьных занятий укажите выпущенную программу проекта, основные цели проекта, имена преподавателей, даты и продолжительность (или кратко опишите это). Также включите письменные оценки и полученные оценки, если таковые имеются.
• Зачисление требуется для всех работ, представленных в портфолио. Если представлена ​​групповая или офисная работа, четко обозначьте свою конкретную роль в работе.
• Не включайте компакт-диски, видео, фильмы, слайды и т. д. Распечатывайте изображения из анимированных материалов (принимаются только распечатанные изображения).
• Не присылайте нечеткие или плохо воспроизведенные фотографии, репродукции или рисунки. Фотографии не должны быть меньше 3х5 дюймов.

Заявление о намерениях

Заявление о намерениях должно представлять собой описание (максимум 750 слов; минимальный размер шрифта 12 пунктов), которое отражает и размышляет о вашем интересе к области архитектуры. это , а не , чтобы быть биографией. Не повторяйте то, что говорит нам резюме. Мы больше всего заботимся о том, что вас интересует. Пожалуйста, будьте искренними и искренними в своих ответах. Ваше Заявление о намерениях должно быть загружено в ваше приложение.

Мы предлагаем вам следующие вопросы, чтобы помочь вам в этом начинании:

• Какой у вас был опыт, который мог пробудить ваш интерес к изучению архитектуры?
• Как вы думаете, что архитектура может предложить нашей культуре в целом?
• Что вы ожидаете получить от образования в области архитектуры?
• Какие три места вам больше всего нравятся и почему?
• Расскажите о остром пространственном опыте.
• Какие ваши любимые три книги и почему (не ограничиваясь книгами по архитектуре)?

Для использования этой формы у вас должен быть включен JavaScript.

Подать заявку

Выберите факультет, колледж или школу
— Выберите -Университет 1Сельскохозяйственные и пищевые науки, Факультет архитектуры (дизайн окружающей среды), Факультет искусств, Школа искусств, Факультет бизнеса, Школа стоматологической гигиены им. И. Х. Аспера, Школа стоматологии, Педагогический колледж доктора Джеральда Низника, Факультет инженерии, Факультет Прайса, Центр английского языка ( ELC) Окружающая среда, Земля и ресурсы, Клейтон Х. Риддел, Факультет дополнительного образования, Общие исследования, Междисциплинарное здравоохранение, Кинезиология и управление отдыхом, Юридический факультет, Медицинский факультет, Музыкальный колледж Макса Рэди, Дезотелс, Факультет медсестер, Фармацевтический колледж, Колледж реабилитационных наук, Колледж естественных наук, Социальный факультет Работа, Факультет

Выберите сельскохозяйственную программу
— Выберите программу «Сельское хозяйство и пищевые науки» (бакалавриат)

в области сельского хозяйства.

Выберите программу Школы искусств
— Select -Изобразительное искусство (BFA, диплом)История искусства (BFA)

Выберите программу IH Asper School of Business
— Выберите -Школа бизнеса Аспера

Выберите программу Школы стоматологической гигиены
— Select -Diploma in Dental HygieneDegree по программе стоматологической гигиены

Выберите стоматологическую программу
— Выберите -Стоматология (DMD)Международная программа получения степени стоматолога (IDDP)

Выберите программу факультета образования
— Выберите -Образование (BEd) Диплом о высшем образовании в области образования

Выберите программу инженерного факультета
— Select-Engineering (BSc) Программа квалификации инженеров с международным образованием (IEEQ)

Выберите программу факультета кинезиологии и управления отдыхом
— Выберите -Спортивная терапия (BKin)Кинезиология (BKin)Физическое воспитание (BPE)Управление отдыхом и развитие сообщества (BRMCD)

Выберите программу Медицинского колледжа Макса Рэди
— Select -MedicineПост-бакалавриат Диплом в области медицинской физиологии и патофизиологии

Выберите программу музыкального факультета Desautels
— Выберите — Музыка (включая изучение джаза) Диплом о высшем образовании (музыкальное исполнение)

Выберите программу колледжа медсестер
— Select — Программа бакалавриата по сестринскому делу и акушерству для дипломированных медсестер

Выберите вариант факультета искусств
— Нет -Бакалавр гуманитарных наукБакалавр гуманитарных наук Комплексные исследования

Запустите или продолжите приложение

Учить больше

• Присоединяйтесь к учащимся со всего мира в разнообразном и поддерживающем сообществе.

  Каково быть студентом UM

• Будь авантюристом, брось себе вызов и измени мир к лучшему.

  Возможности для студентов из числа коренных народов

• Получите образование мирового класса в самом сердце Канады

  Почему иностранные студенты учатся у нас

• Мы предлагаем современное оборудование со 140-летней историей.

  Наши кампусы

Свяжитесь с нами

Вопросы о приеме и подаче заявлений

Адрес рассылки
Прием бакалавриата
424 UMSU University Center
Университет Манитобы
66 Канцлеров Circle
Winnipeg, MB R3T 2N2 Канада

Офисный место. кампус Форт-Гарри)

[email protected]
Телефон: 204-474-8808
Бесплатный звонок: 1-800-224-7713 доб. 8808

Запросы программы

Программа экологического дизайна
Факультет архитектуры
201 John A. Russell Building
84 Curry Place
University of Manitoba (кампус Fort Garry)
Winnipeg, MB R3T 2M6

[email protected] -474-6578
Факс: 204-474-7532

Полногеномное секвенирование и таксономическое профилирование двух Pantoea sp. выделен из образцов окружающей среды в Израиле

BMC Genom Data. 2022 г.; 23: 31.

Опубликовано в сети 21 апреля 2022 г. doi: 10.1186/s12863-022-01049-7

, ^{, , , , , , и}

АВТОРСКАЯ ЗАМЕЧА с целью выделения бактерий, секретирующих ингибирующие рост соединения, культуры Francisella tularensis имплантировали в образцы окружающей среды и отслеживали наличие зон ингибирования на агаре. Были выделены две бактерии, секретирующие антибиотики, расшифрована их геномная последовательность, и анализ таксономического профиля классифицировал их как принадлежащие к Род Pantoea .

Описание данных

Два бактериальных изолята с зонами ингибирования роста по сравнению с F. tularensis (LVS) были проанализированы с использованием технологии Oxford Nanopore (ONT). Была выполнена предварительная сборка прочтений de novo с последующим таксономическим профилированием на основе анализа многолокусных последовательностей (MLSA) и измерения средней идентичности нуклеотидов (ANI). Геномные последовательности привели к идентификации двух разных Pantoea 9.0262 вида, обозначенных как EnvD и EnvH.

Последующая сборка генома de novo сгенерировала 5 и 10 контигов для EnvD и EnvH соответственно. Самый большой контиг (4 008 183 п.н. и 3 740 753 п.н. для EnvD и EnvH соответственно) в значительной степени перекрывается с хромосомой близкородственных видов Pantoea . Значения ANI, рассчитанные для обоих изолятов, выявили два явно новых вида рода Pantoea .

Наше исследование расшифровало идентичность двух бактерий, продуцирующих антибиотикоподобные соединения, и геномная последовательность показала, что они представляют разные Pantoea вида.

Ключевые слова: Pantoea , Образцы окружающей среды, Секвенирование всего генома, Oxford nanopore, Сборка De novo, Таксономия

Pantoea — род грамотрицательных бактерий, принадлежащих к семейству Erwiniaceae. Эти бактерии были выделены из множества источников окружающей среды (таких как растения, животные, вода, почва и человек). Они широко распространены в природе, и уже зарегистрировано более 25 видов [1–4]. В этом исследовании мы представляем таксономическое профилирование двух изолятов из окружающей среды, которые были идентифицированы по их способности ингибировать рост Колонии F. tularensis (LVS). Изоляты секвенировали с помощью длинного считывания и собирали с помощью сборки de novo. Мы рассчитали показатель ANI, чтобы установить родство видов, и метод MLSA был реализован для создания филогенетического дерева, показывающего эти варианты как новые виды Pantoea .

В рамках этого исследования было отобрано более 20 проб окружающей среды из разных географических точек Израиля (природные источники). Образцы готовили, протирая 20 см ² площадь городских асфальтированных дорог 3 стерильными ватными тампонами (Copan Italia SPA), асептически смоченными в стерильном фосфатно-солевом буферном растворе (PBS). Тампоны выбрасывали после экстракции вортексом в 5 мл PBS. Через 2 мин. пассивного оседания пыли и грязи в новую стерильную пробирку перенесли 4,2 мл. Аликвоту по 0,1 мл каждой пробы окружающей среды смешивали с 0,1 мл PBS, содержащего 10 ⁸ КОЕ/мл индикаторных бактерий ( F. tularensis LVS), смесь наносили на цистеиновый сердечный агар с гемоглобином (CHA, Difco ), планшеты инкубировали в течение 2 дней при 37 °C и отслеживали наличие колоний, демонстрирующих зону ингибирования для индикаторного штамма. Несколько таких колоний были дополнительно выделены в чистые культуры на CHA, и было подтверждено их ингибирование LVS. Два изолята продемонстрировали разную способность к росту в бульоне для инфузии мозга и сердца и были обозначены здесь как EnvD (из промышленной зоны Тальпиот, Иерусалим) и EnvH (из района Ромема, Хайфа). Для очистки ДНК колонии EnvD и EnvH выращивали на CHA, суспендировали до высокой плотности в 1 мл PBS, смешивали 1:1 с ATL-буфером, нагревали при 100 °C в течение 30 мин перед очисткой ДНК с использованием мининабора QIAamp DNA blood minikit (Qiagen). . Секвенирование всего генома было проведено в центре GenoHub (https://genohub.com) с использованием технологии Oxford Nanopore MinION. Библиотеки для EnvD и EnvH были подготовлены с использованием SQK-LSK109.набор для секвенирования лигирования (Oxford Nanopore Technologies), и секвенирование проводили с использованием проточной кюветы R9. Базовый вызов выполнялся с помощью Guppy v 4.4.2. Всего было получено 210 000 прочтений для EnvD (средняя длина 3854 бит/с) и 190 000 прочтений для EnvH (средняя длина 1881 бит/с), в результате чего охват составил 155x  и 89x соответственно (файл данных 1) [5]. Сборка

De novo проводилась с помощью реализации Flye [6], предназначенной для сборки длинных ридов, сгенерированных ONT. Для EnvD было получено пять контигов, самый большой из которых имеет длину 4 008 183 п. н., поэтому значение N50 составляет 4 008 183. Сгенерированные EnvH чтения были собраны в общей сложности в 10 контигов, самый длинный из которых составлял 3 740 753 бита в секунду (что, следовательно, является значением N50). Грубая и предварительная оценка таксономического родства двух изолятов, проведенная с помощью Blast-анализа [7] по базе данных нуклеотидов (nt, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/нуклеотид/), выявила сходство с Род Pantoea . Впоследствии самый длинный контиг каждого изолята сравнили со всеми общедоступными последовательностями Pantoea (Национальный центр биотехнологической информации, NCBI), показывая, что наиболее подходящими совпадениями для EnvD и EnvH являются Pantoea agglomerans и Pantoea stewartii соответственно. . Соответственно, контиги, сгенерированные сборкой, были выровнены по своим ближайшим видам с помощью Mauve [8]. Выравнивания показывают почти полное покрытие эталонной хромосомы самым большим контигом как для EnvD, так и для EnvH. Кроме того, два оставшихся контига перекрывают плазмидные области в эталонных геномах (файл данных 2) [9].].

Чтобы дополнительно охарактеризовать, могут ли секвенированные геномы быть связаны с одним из уже известных видов Pantoea , мы использовали показатель ANI как хорошо зарекомендовавший себя показатель сходства всего генома [10–14]. Значение ANI оценивали с помощью алгоритма FastANI [12]. Попарные значения ANI не более 82% были получены для каждого из секвенированных геномов с геномами, представляющими известный вид Pantoea [15]. Согласно общепринятому пороговому значению 95% используется в качестве границы для разграничения видов [14, 16], оказывается, что EnvD и EnvH составляют новые виды в пределах рода Pantoea . Следует отметить, что парное значение ANI между EnvD и EnvH составляет 83%, что представляет собой две разные линии передачи.

Для присвоения таксономического профиля двух изолятов мы внедрили метод типирования Multi Locus Sequence Analysis (MLSA), адаптированный для филогенетического анализа вида Pantoea [17, 18], с использованием пяти основных генов, которые эффективны для видов- уровень разграничения рода Pantoea : fusA , gyrB , leuS , pyrG и rpoB [1]. Последовательности генов, ортологичных EnvD и EnvH, были извлечены из последовательностей контигов, охватывающих области хромосом (контиг 4 для EnvD и контиг 3 для EnvH), и объединены в мини-ген. Кроме того, пять кодирующих белок генов были выделены из 37 репрезентативных, эталонных и/или типовых штаммов видов Pantoea и Tatumella (полный список видов, включенных в набор из 37 геномов, см. в [17]). . Множественное выравнивание 37 конкатенированных последовательностей вместе с конкатенированными последовательностями, происходящими из EnvD и EnvH, было построено с использованием алгоритма MAFFT (множественное выравнивание с использованием быстрого преобразования Фурье) [19].] устройства MegAlign™ Pro (© 1993–2020) (DNASTAR®). Филогенетический анализ выровненных последовательностей был проведен с использованием инструмента PhyML [20], который оценивает филогении максимального правдоподобия (NGPhylogeny.fr [21]). Каждый из новых изолятов, EnvD и EnvH, образует отдельную ветвь (файл данных 3) [22]. В то время как EnvH связан с видами Pantoea stewartii , Pantoea ananatis и Pantoea allii , EnvD не только является ответвлением от отдельного кластера, но и относительно удален от видов в этом кластере (который включает, среди прочего, 9 видов).0261 Pantoea agglomerans , что подтверждает предварительное назначение, описанное выше для EnvD).

В заключение, две бактерии, ингибирующие рост, из образцов окружающей среды, собранных в двух различных районах Израиля, были идентифицированы и отнесены к роду Pantoea . Их таксономическое профилирование показало, что эти бактерии могут быть классифицированы как новые виды Pantoea , отличающиеся от известных видов Pantoea , описанных на сегодняшний день. Дальнейшая экспериментальная характеристика механизма, вовлеченного в ингибирование роста LVS этих Pantoea сейчас выполняется. Ссылки на файлы данных 1–4 и наборы данных 1–3 см. в таблице. .

Таблица 1

Обзор файлов/наборов данных

Этикетка	Имя файла/набора данных	Типы файлов (расширение файла)	Идентификатор данных30 и репозитория9 (DOI или номер доступа20)
Файл данных 1	Метрики секвенирования и сборки	Файл Portable Document Format (. pdf)	https://doi.org/10.6084/m9.figshare.15111765.v1 [5]
Файл данных 2	Выравнивание контигов по эталонному геному pdf)	https://doi.org/10.6084/m9.figshare.15105198.v1 [9]
Файл данных 3	6	Значения ANI для 26 Panto spea 16 EnvD и Pantoea sp. EnvH	Файл в формате Portable Document Format (.pdf)	https://doi.org/10.6084/m9.figshare.19204658.V2 [15]
Файл данных 4	PHYLEGEDETICS Analys	36 DACTABLE	. ://doi.org/10.6084/m9.figshare.15111588.v3 [22]
Набор данных 1	Секвенирование Pantoea sp. EnvD и Pantoea sp. EnvH	Файл Fastq (.fastq.gz)	SRP316834 [23]
Набор данных 2	Сборка генома Pantoea sp. EnvD	FASTA / GenBank / ASN.1	{«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст»:»JAGTWO000000000.1″,»term_id»:»2051287946″,»term_text»: «JAGTWO000000000.1»}}JAGTWO000000000.1 [24]
Набор данных 3	Сборка генома Pantoea sp. EnvH	FASTA / GenBank / ASN. 1	{«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«текст»:»JAGTWN000000000.1″,»term_id»:»2051287947″,»term_text»:»JAGTWN000000000.1″}}JAGTWN000000000.1 [25]

Открыть в отдельном окне

• Сборка de novo привела к очень большому количеству контигов; в то время как самый длинный контиг

• По практическим соображениям филогенетическое родство двух видов Pantoea EnvD и EnvH основано на ограниченном наборе данных. из 37 известных видов Pantoea , состоящих из репрезентативных, эталонных и/или типовых штаммов видов Pantoea и Tatumella .

Мы благодарим доктора Ади Бет-Дин за плодотворные обсуждения.

YGD: проанализировал данные и написал рукопись; ICG: проанализировала данные; OI: выполнил секвенирование и написал рукопись; ОС: проводил эксперименты; ТА: провел эксперименты; СР: проводил эксперименты и помогал интерпретировать результаты; РБ: разработал эксперименты, руководил проектом и написал рукопись; AZ: руководил биоинформационным анализом и написал рукопись. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Это исследование не получило внешнего финансирования.

Файлы данных 1–4, описанные в этом примечании к данным, могут быть свободно и открыто доступны на Figshare (https://figshare.com/) [5, 9, 22]. Наборы данных 1–3 доступны в базе данных NCBI. Необработанные считывания были отправлены в архив чтений последовательностей NCBI под регистрационным номером SRP316834 для Pantoea sp. EnvD и Pantoea sp. EnvH (набор данных 1) [23–25]. Геномные сборки двух образцов были отправлены в NCBI GenBank и доступны под инвентарным номером {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»JAGTWO000000000″,»term_id»:»2051287946″,»term_text»:»JAGTWO000000000″}}JAGTWO000000000 для Pantoea sp. EnvD и инвентарный номер {«type»:»entrez-нуклеотид»,»attrs»:{«text»:»JAGTWN000000000″,» term_id»:»2051287947″,»term_text»:»JAGTWN000000000″}}JAGTWN000000000 для Pantoea sp.EnvH (наборы данных 2–3) [24, 25].

Согласие на публикацию

Неприменимо

Конкурирующие интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

Примечание издателя

Springer Nature остается нейтральной в отношении юрисдикционных претензий в опубликованных картах и ​​институциональной принадлежности.

1. Тамбонг Дж.Т. Таксогеномика и систематика рода Pantoea. Фронт микробиол. 2019;10:2463. doi: 10.3389/fmicb.2019.02463. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

2. Agarwal G, Choudhary D, Stice SP, MyersGitaitis BKRD, Venter SN, et al. Пангеномный анализ Pantoea ananatis выявил гены, связанные с патогенностью лука. Фронт микробиол. 2021;12:684756. дои: 10.3389/fmicb.2021.684756. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

3. Агарвал Г., Гитайтис Р.Д., Датта Б. Пангеном нового подвида indologenes Pantoea stewartii выявляет гены, участвующие в патогенности лука, и доказательства латерального переноса генов. Микроорганизмы. 2021;9(8):1761. doi: 10.3390/microorganisms

61. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

4. Stice SP, Shin GY, De Armas S, Koirala S, Galvan GA, Siri MI, et al. Распределение кластеров генов вирулентности среди Pantoea spp. Фронт завод науч. 2021;12:643787. doi: 10.3389/fpls.2021.643787. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

5. Файл данных 1: показатели секвенирования и сборки. Figshare: 10.6084/m9.figshare.15111765.v1 (2021).

6. Колмогоров М., Бикхарт Д.М., Бехсаз Б., Гуревич А., Райко М., Шин С.Б., и соавт. metaFlye: масштабируемая сборка метагенома с длительным чтением с использованием графов повторов. Нат Методы. 2020;17(11):1103–1110. doi: 10.1038/s41592-020-00971-x. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]

7. Альтшул С.Ф., Гиш В., Миллер В., Майерс Э.В., Липман Д.Дж. Базовый инструмент локального поиска выравнивания. Дж Мол Биол. 1990;215(3):403–410. doi: 10.1016/S0022-2836(05)80360-2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

8. Darling AC, Mau B, Blattner FR, Perna NT. Розовато-лиловый: множественное выравнивание консервативной геномной последовательности с перестройками. Геном Res. 2004;14(7):1394–1403. doi: 10.1101/gr.2289704. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

9. Файл данных 2: сопоставление контигов с эталонным геномом. Фиговая доля: 10,6084/м9.figshare.15105198.v1 (2021).

10. Фигерас М.Дж., Беаз-Идальго Р., Хоссейн М.Дж., Лайлес М.Р. Таксономическая принадлежность новых геномов должна быть подтверждена с использованием средней нуклеотидной идентичности и мультилокусного филогенетического анализа. Объявление генома. 2014;2(6):e00927–14. doi: 10.1128/genomeA.00927-14. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

11. Arahal DR. Полногеномный анализ: средняя идентичность нуклеотидов. Методы микробиологии. 2014;41:103–22.

12. Джейн С., Родригес Р.Л., Филлиппи А.М., Константинидис К.Т. , Алуру С. Высокопроизводительный анализ АОН 90K прокариотических геномов выявляет четкие границы видов. Нац коммун. 2018;9(1):5114. doi: 10.1038/s41467-018-07641-9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

13. Константинидис К.Т., Тиедже Дж.М. Геномные идеи, которые расширяют определение вида прокариот. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005;102(7):2567–2572. doi: 10.1073/pnas.0409727102. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

14. Горис Дж., Константинидис К.Т., Клаппенбах Дж.А., Коэнье Т., Вандамм П., Тиедже Дж.М. Значения гибридизации ДНК-ДНК и их связь со сходством последовательностей всего генома. Int J Syst Evol Microbiol. 2007; 57 (часть 1): 81–9.1. doi: 10.1099/ijs.0.64483-0. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

15. Файл данных 3: Таблица оценок ANI для Pantoea sp. EnvD и Pantoea sp. EnvH. Figshare: 10.6084/m9.figshare.19204658.v2 (2022).

16. Рихтер М., Росселло-Мора Р. Изменение геномного золотого стандарта для определения прокариотических видов. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106(45):19126–19131. doi: 10.1073/pnas.0